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细菌内毒素查抄法(定量检测)之光度测定法

颁布功夫:2011-01-27
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光度测定试验应在特定的仪器中进行  ,温度通常为37℃±1℃ 。

为保障浊度和显色试验的有效性  ,应预先进行尺度曲线的靠得住性试验以及供试品溶液的滋扰试验 。当试验环境中产生了任何可能影响检测了局的扭转时  ,试验的有效性应沉新检测 。

尺度曲线的靠得住性试验

尺度曲线的造备

用尺度内毒素配成溶液并造成至少3个浓度的稀释液(稀释度不得大于10)  ,最低浓度不得低于所用MG游戏官网的标示检测限 。每一稀释步骤的混匀功夫同凝胶法  ,每一浓度至少做3支平行管 。同时要求做2支阴性对照 。当阴性对照在设定的功夫内不产生反映  ,将全数数据进行线性回归分析 。

凭据线性回归分析  ,尺度曲线的有关系数(r)的绝对值应该大于或蹬宗0.980  ,试验方有效 。不然须沉新试验 。

滋扰试验

选择尺度线中点或一个靠近中点的内毒素浓度 。按表4造备溶液A、B、C和D 。供试品和MG游戏官网的加样量、供试品和MG游戏官网的比例以及保温功夫等  ,参照所用仪器和试剂的有关注明进行 。每种溶液至少做2个平行管 。


表4 光度测定法滋扰试验的造备

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注 A:稀释倍数未超过MVD的供试品溶液 。

B:参与尺度曲线中点或靠近中点的一个已知内毒素浓度的  ,且与溶液A有一样稀释倍数的供试品溶液 。

C:如“尺度曲线的靠得住性试验”项下描述的  ,用于造备尺度曲线的尺度内毒素溶液 。

D:阴性对照 。

按所得线性回归方程别离推算供试品溶液和含尺度内毒素的供试品溶液的内毒素含量Ct和Cs  ,再按下式推算该试验前提下的回收率(R) 。

R=(CS-Ct)/λm×100%

当内毒素的回收率在50%~200%之间  ,则以为在此该试验前提下供试品溶液不存在滋扰作用 。

当内毒素的回收率不在指定的领域时  ,须按“凝胶法滋扰试验”中的步骤去除滋扰成分 。并要沉复滋扰试验来验证处置的有效性 。

查抄法

按“光度法的滋扰试验”中的操作步骤进行检测 。

使用溶液C天生的尺度曲线来推算溶液A的每一平行管的内毒素浓度 。

试验必须切合以下三个前提方为有效:

(1)系列溶液C的了局要切合“光度技术预试验”下“尺度曲线的靠得住性试验”中的要求 。

(2)用溶液B中的内毒素浓度减去溶液A中的内毒素浓度后  ,推算出的内毒素的回收率要在50%-200%的领域内 。

(3)溶液D(阴性对照)在划定的反映功夫内未检测出内毒素 。

若供试品溶液地点平行管的均匀内毒素浓度乘以稀释倍数和浓度后  ,幼于划定的内毒素限值  ,判供试品切合划定 。若大于划定的内毒素限值  ,判供试品不切合划定 。

(注:本查抄法中  ,“管”的意思蕴含其他任何反映容器  ,如微孔板中的孔 。)


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