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肠职能复原汤对MODS大鼠细菌和内毒素移位及血清MDA和SO
作者：王春荣 ，程永刚 ，曾 津 作者单元：西安交通大学医学院第一从属医院：1. 通常表科；2. 泌尿表科 ，陕西西安 710061
【提要】
主张 通过成立SD大鼠MODS模型 ，观察肠职能复原汤对多器官职能阻碍综合征(MODS)大鼠细菌和内毒素移位及血清丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)含量的影响 ，索求MODS新的防治蹊径。
步骤 SD大鼠57只 ，随机分为对照组、MODS模型组、肠职能复原汤医治组和氨苄西林医治组 ，别离检测各组表周静脉血、门静脉血及回肠内容物的内毒素含量 ，测定血清MDA、SOD含量和ALT、AST、Cr及BUN含量 ，同时取肠系膜静脉血、肠系膜淋趋附、肝、肾、肺和脾组织进行细菌造就 ，观察细菌移位情况 ，取回肠组织造成石蜡切片 ，HE染色 ，光镜下观察。
了局 模型组、肠职能复原汤组和氨苄西林组的肝肾职能受到显著的侵害 ，回肠黏膜分歧水平产生上皮细胞水肿、坏死、脱落、绒毛危险断裂、炎细胞浸润；肠职能复原汤组与模型组相比 ，表周血、门静脉血及回肠内容物的内毒素含量、血清MDA、ALT、AST、Cr及BUN含量均显著降低(P<0.01) ，SOD含量显著升高(P<0.01) ，但氨苄西林组与模型组相比上述指标差距不显著(P>0.01)。在模型组与氨苄西林组内 ，MDA和SOD的含量呈负有关(P<0.01)。肠职能复原汤组和氨苄西林组的细菌移位率均比模型组低 ，二者间无显著性差距(P>0.01)。结论 肠职能复原汤能抑造MODS大鼠的细菌、内毒素移位和氧化抗氧化失衡。
【关键词】 肠职能复原汤；多器官职能阻碍综合征(MODS)；细菌和内毒素移位；丙二醛(MDA)；超氧化物歧化酶(SOD)
器官职能阻碍综合征(multiple organ dysfunction syndrome, MODS)是临床上常见的危沉症之一。肠路不仅在维持机体正常营养及生理机能中起着极其沉要的作用 ，同时还活跃地参加创伤、烧伤和习染后的各类应激反映 ，是MODS产生的始动器官[12]。近年来 ，国内已有好多学者[34]利用中医“通里攻下”的理论 ，对MODS的防治作了较为深刻的钻研。钻研了局批注：通里攻下法可有效；こ︷つし ，削减细菌和内毒素移位 ，减轻全身炎性反映和降低血清内毒素水平。肠职能复原汤由大黄、丹参等10余味中药组成 ，拥有通里攻下、活血化淤等作用。本尝试通过成立SD大鼠MODS模型 ，观察肠职能复原汤对MODS大鼠细菌和内毒素移位及血清丙二醛(malondialdehyde, MDA)和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)含量的影响 ，索求MODS新的防治蹊径。
1 资料与步骤
1.1 资料 SD大鼠57只 ，清洁级 ，雌雄不限 ，体沉(248.3±16.3)g。T6型新世纪紫表分光光度计；超速离心理；OLYPAS光学显微镜(日本)；显色基质MG游戏官网盒和除热原耗材均购自乐山市MG游戏官网尝试厂有限公司；MDA、SOD、ALT、AST、Cr、BUN试剂盒 ，氨苄西林。
肠职能复原汤由大黄20g(后放入)、丹参12g、党参15g、白术15g、陈皮15g、木香12g、桃仁12g、赤芍15g、火麻仁30g、枳实12g等组成。浓缩煎造成浓度为1∶1的药液(含生药1g/mL) ，灭菌处置后4℃冰箱内保留。
1.2 MODS动物模型的成立 通过肠缺血再灌注结合盲肠结扎穿孔法成立大鼠MODS模型[56]。大鼠于造模前24h禁食 ，自由饮水。称沉后赐与腹腔注射100mL/L水合氯醛(30mg/100g)麻醉 ，尝试台上仰卧固定 ，腹部脱毛后通例消毒铺无菌巾 ，取腹部正中隐语进腹 ，露出肠系膜上动脉(superior mesenteric artery, SMA) ，各组别离用无创夹夹关其根部45min ，松夹即为再灌注。在进行SMA夹关期间 ，间断地向腹腔内注射等渗盐水 ，总量约15～20mL/kg ，以预防或减轻在放松动脉夹后出现的一过性低血容量反映。同时 ，游离盲肠 ，把稳；こο的ぱ ，找到盲肠与回结肠接壤处 ，距回盲接壤约1cm处游离出回盲动脉 ，于动脉弓内侧 ，穿过4号丝线 ，并环行结扎盲肠 ，把稳维持回结肠畅达。在盲肠游离端用9号针头贯通2次穿孔 ，直径约2mm ，将盲肠放回腹腔后关腹。建成大鼠MODS模型。
1.3 动物分组 57只大鼠随机分为3组 ，正常对照组(control group)12只：正常大鼠肠职能复原汤灌胃；MODS模型组(MODS group)15只：造模后生理盐水灌胃；肠职能复原汤医治组(decoction group)15只：造模后即赐与肠职能复原汤灌胃；以上三组均10mL/kg体沉 ，2次/d ，陆续2d。氨苄西林医治组(ampicillin group)15只：造模后即赐与氨苄西林灌胃 ，89.25mg/kg体沉 ，2次/d ，陆续2d。
1.4 血清内毒素含量的测定 各组动物于造模成功48h后 ，用100mL/L水合氯醛(30mg/100g)麻醉 ，严格无菌操作下用无热原注射器采取门静脉血、表周血 ，迅速低温离心10min(1000r/min) ，吸出上清液 ，以鲎试验偶氮基质显色法定量测定 ，了局以eu/mL暗示 ，严格按说明书操作。
1.5 回肠内容物的内毒素含量的测定 各组造模动物于麻醉后取回肠结尾内容物 ，称沉后参与无热原盐水混匀并离心(4℃ ，5000r/min ，10min)。上清液以无热原水陆续10倍稀释6次后以鲎试验偶氮基质显色法定量测定 ，了局以106 eu/g暗示。
1.6 MDA和SOD含量的测定 MDA用硫代巴比妥酸法(TBA法)测定 ，SOD用黄嘌呤氧化酶法测定 ，均严格按说明书操作。
1.7 血清丙氨酸氨基转移酶、天门冬氨酸氨基转移酶、肌酐和尿素氮含量的测定 各组动物于造模成功48h后 ，于麻醉状态下 ，严格无菌操作下采取下腔静脉血 ，用赖氏法测定血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)的含量 ，用脲酶法测血清尿素氮(BUN)的含量 ，用除蛋白法测血清肌酐(Cr)的含量。
1.8 细菌的造就 各组动物于造模成功48h ，麻醉后无菌前提下打开腹腔 ，别离取肠系膜淋趋附(mesenteric lymph node, MLN)、肝、肾、肺及脾组织各0.5g ，参与生理盐水1mL造成匀浆 ，取匀浆液0.5mL ，接种于直径10cm的中国兰造就基平皿内 ，同时取肠系膜上静脉血0.5mL参与造就基中作细菌造就 ，37℃前提下孵育48h ，若是造就基平皿菌落数多于100个/g组织记为细菌造就阳性 ，细菌移位率按细菌造就的阳性脏器数/造就脏器总数推算。
1.9 幼肠黏膜病理状态学的观察 各组动物于造模成功48h ，麻醉后于距盲肠5cm处取回肠组织 ，100mL/L甲醛固定 ，石蜡包埋切片 ，行HE 染色 ，光镜下观察。
1.10 统计学处置 尝试数据均以均数±尺度差(±s)暗示 ，选取SPSS13.0统计软件进行分析。进行齐全随机设计资料的多个样本均数比力的单成分方差分析 ，如差距有显著性意思 ，选取SNKq检验进行多个样本均数间多沉比力。细菌移位率选取Fisher确切概率法进行检验。有关性检验选取线性有关分析。P<0.01以为差距有统计学意思。
2 结 果
2.1 MODS模型组大鼠的通常情况和殒命率的变动 模型组动物于造模6h后即阐发出反映痴钝、活动削减、腹泻、呼吸窘迫、足尾潮红、口唇发绀等阐发 ，开腹后可见腹腔内大量脓性渗出液 ，肠蠕动极弱甚至隐没 ，肠浆膜面充血水肿 ，表表有脓苔 ，肝脏水肿 ，表表可见大量出血点 ，总殒命率为33.33%。肠职能复原汤组的总殒命率为26.67% ，氨苄西林组的总殒命率为33.33% ，两组大鼠的通常情况和开腹后所见均好于模型组。
2.2 模型组和肠职能复原汤组大鼠回肠组织的病理学观察 光镜显示模型组回肠黏膜上皮细胞水肿、坏死、部门脱落、绒毛危险断裂和炎细胞浸润(图1A) ，肠职能复原汤组的病理状态较模型组好(图1B)。
2.3 各组大鼠血清ALT、AST、BUN和Cr含量的比力 模型组、肠职能复原汤组和氨苄西林组的肝、肾职能受到显著的侵害 ，肠职能复原汤组与模型组相比 ，血清中ALT、AST、BUN和Cr含量均显著降低(P<0.01) ，但氨苄西林组与模型组相比上述指标差距不显著(P>0.01 ，表1)。
2.4 各组大鼠门静脉血、表周血和回肠内容物中内毒素含量的比力 肠职能复原汤组与模型组相比 ，表周血、门静脉血及回肠内容物中内毒素含量均显著降低(P<0.01) ，而氨苄组与模型组相比上述指标差距不显著(P>0.01 ，表2)。 表1 各组大鼠血清ALT、AST、Cr和BUN含量的比力表2 各组大鼠表周血、门静脉血及回肠内容物中内毒素含量的比力
2.5 各组大鼠细菌移位情况的比力 正常对照组大鼠仅在MLN中造就出细菌；模型组细菌移位率最高 ，为88.33%；肠职能复原汤组细菌移位率为43.94% ，氨苄西林医治组细菌移位率为46.67% ，二者与模型组相比 ，细菌移位率显著降落(P<0.01) ，二者间差距不显著(P>0.01 ，表3)。表3 各组大鼠细菌移位情况的比力
2.6 各组大鼠血清MDA和SOD含量的比力 肠职能复原汤组与模型组相比 ，MDA含量显著降低(P<0.01) ，SOD显著升高(P<0.01) ，而氨苄西林组与模型组相比 ，MDA和SOD含量差距不显著(P>0.01)。在模型组与氨苄西林组内 ，MDA和SOD的含量呈负有关(r=-0.864 ，P<0.01；r=-0.808 ，P<0.01 ，表4)。表4 各组大鼠血清MDA和SOD含量的比力
3 讨 论
本钻研通过幼肠缺血再灌注结合盲肠结扎穿孔法成立SD大鼠MODS模型 ，了局显示 ，模型组的肝肾职能受到显著的侵害 ，肝脏水肿 ，表表可见大量出血点 ，肠蠕动极弱甚至隐没 ，肠浆膜面充血水肿 ，表表有脓苔。批注已成功成立SD大鼠MODS模型。肠职能复原汤能显著减轻MODS大鼠的细菌和内毒素移位 ，并抑造氧化抗氧化系统的失衡。
肠职能复原汤由大黄等10余味中药组成 ，大黄导热泻下 ，火麻仁润肠通便 ，枳尝试气破结 ，白术、陈皮健脾和胃 ，党参益气补中 ，丹参活血通经 ，桃仁、赤芍活血化淤 ，木香行气。在我院已有三十余年的临床利用 ，拥有推进肠蠕动 ，推进术后胃肠路职能复原及肠路营养吸收等作用 ，但对细菌和内毒素移位和机体氧化抗氧化系统的影响目前尚未有有关钻研。
目前 ，国内表对MODS的发病机造有三种假说：即肠路细菌与内毒素移位学说、微循环阻碍学说和细胞因子和炎症介质学说[7]。当机体遭逢严沉创伤、休克、习染等进攻后 ，可相继出现多种细胞因子及炎性介质的瀑布样开释和一系列病理生理扭转；肠路菌群生态平衡粉碎 ，革兰氏阴性细菌过度成长 ，肠黏膜樊篱粉碎等而导致肠路细菌与内毒素移位 ，出现败血症及内毒素血症。内毒素又可激活巨噬细胞、单核细胞、中性粒细胞等 ，开释多种炎性介质 ，形成恶性循环。因而 ，；こ︷つし榧捌渲澳 ，抑造细菌和内毒素移位 ，阻滞这一恶性循环 ，对于MODS的防治拥有极度沉要的意思。
本钻研发现 ，MODS模型组大鼠产生了显著的细菌和内毒素移位 ，肠职能复原汤医治组的表周血、门静脉血和回肠内容物中内毒素含量显著降低 ，肝、肾等脏器的细菌移位率显著降低。其机造可能有以下几点：①肠职能复原汤对肠路内内毒素的稀释和物理冲刷作用减低了内毒素的浓度；②火麻仁、白术[8]能够推进胃肠路蠕动 ，从而加快了肠路内细菌和内毒素的排出 ，同时抑造细菌的定植 ，削减了内毒素的产生；③大黄、木香、丹参、党参[8]均有分歧水平的抗菌作用 ，能够抑造肠内菌群生态平衡错乱 ，；こ︷つさ纳锓。此表 ，丹参、党参等还有扩张胃肠路血管、改善微循环和促纤溶、抗血栓形成的作用 ，以此；こ︷つ ，减轻了内毒素移位。氨苄西林等抗生素固然有较强的抗菌能力 ，但在大量杀灭敏感细菌的同时 ，因菌体分裂而产生更多的内毒素 ，还可能粉碎肠路细菌的微生态平衡 ，粉碎肠路生物学樊篱从而进一步加沉细菌和内毒素移位及其对机体的危险。
本钻研发现 ，肠职能复原汤能够抑造MODS大鼠的氧化抗氧化系统失衡。而氨苄西林的这一作用不显著。其机造可能为：①大黄、丹参、桃仁等的中药成分加强了机体的抗氧化能力 ，抑造了活性氧类物质对细胞的危险；②党参、丹参等能够改善微循环和促纤溶 ，；ぷ橹赴 ，削减活性氧类物质的产生；③肠职能复原汤能削减肠路内内毒素的产生 ，减轻细菌和内毒素的移位 ，从而；じ巍⑸觥⒎蔚瘸烈橹鞴俚闹澳 ，更好地维持机体氧化抗氧化系统的平衡。
综上所述 ，与传统的“通里攻下”汤剂大承气汤相比 ，肠职能复原汤从多方位、多蹊径显著减轻MODS大鼠的细菌和内毒素移位 ，抑造氧化抗氧化系统的失衡 ，但其具体机造还有待于进一步深刻钻研。
参考文件（略）
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