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动态浊度法的成立及测定角膜真菌习染标本的初步钻研
作者：刘雄伟，王香兰，彭淑玲，周 毅
【提要】 主张 成立动态浊度法，钻研角膜真菌习染的检测。步骤 别离测定葡聚糖尺度品、内毒素尺度品、真菌尺度株(烟曲菌、串珠镰刀菌和茄病镰刀菌)及细菌尺度株(绿脓杆菌、金黄色葡萄球菌)，测定19例临床标本。
了局 葡聚糖的浓度功夫曲线为双曲线，功夫反映曲线显示反映速度较低。内毒素的浓度功夫曲线为直线，功夫反映曲线显示反映速度较高。三种真菌的浓度功夫曲线和功夫反映曲线与葡聚糖的类似，革兰阴性菌（绿脓杆菌）的浓度功夫曲线和功夫反映曲线与内毒素的类似，革兰阳性菌（金黄色葡萄球菌）没有反映。临床19例标本，凭据其浓度功夫曲线和功夫反映曲线的状态，11例确诊为真菌习染，8例为革兰阴性细菌曲线，为真菌和细菌的混合习染。
结论 动态浊度法可用于角膜真菌习染的检测，但对细菌-真菌混合习染不能确诊。
【Abstract】 Objective To establish the turbidimetric kinetic assay and study the measurement of fungus infection in corneal specimen.Methods Glucan， endotoxin， fungus(Aspergillus fumigatus，Fusariun moniliforme and Fusariun solani) and bactiria(Pseudomonas aeruginosa and Staphylococcus aureaus) were measured. 19 clinic specimens were also measured.Results The concentration-time curve of glucan was hyperbola and its time-reaction curve had low reaction rate. The concentration-time curve of endotoxin was beeline and its time-reaction curve had high reaction rate. The concentration-time curve and time-reaction curve of 3 fungi were same as that of glucan. The concentration-time curve and time-reaction curve of G- bacterium(Pseudomonas aeruginosa) were as same as that of endotoxin. The G+ bacterium(Staphylococcus aureaus) had no reaction. According the concentration-time curve and time-reaction curve， 11 specimens were diagnosed fungi and 8 specimens were co-infection of fungi and bacteria.Conclusion Fungi infection in cornea could be diagnosed by turbidimetric kinetic method. Co-infection of fungi and bacteria could not be diagnosed by this method.
【关键词】 动态浊度法 ；真菌 ；角膜 ；葡聚糖
【Key words】 turbidimetric kinetic method ；fungus ；cornea ；glucan
角膜真菌习染的诊断较难，如不能实时医治，对患者造成侵害，因而急剧诊断极度必要。真菌的诊断通常选取镜检和造就的步骤，镜检较快，但漏检率较高，真菌造就的步骤，检出率较高，但功夫较长。我们使用MG游戏官网与真菌的葡聚糖反映的道理，成立动态浊度法并对角膜标本进行真菌测定。
1 资料与步骤
1.1 试剂 葡聚糖尺度品(031222，规格：300μg/ml)，MG游戏官网（批号040532，活络度：0.25Eu/ml）购自乐山MG游戏官网厂，内毒素尺度品（批号2002-7）和检测用水(批号2003-3)购自中国药品生物制品检定所。
1.2 仪器 细菌内毒素测定仪、振荡器，超声波处置器、离心理。
1.3 葡聚糖和内毒素的浓度-功夫曲线
1.3.1 葡聚糖 将其倍比稀释为100、50、25、12.5、6.25、3.13、1.56、0.78、0.39和 0.20μg/ml，取其200μl参与100μlMG游戏官网，振荡30s，放入细菌内毒素测定仪测定，测定温度为(37±1)℃。
1.3.2 内毒素 将其10倍稀释为50、5、0.5、0.05和0.005EU/ml，按上述步骤测定。
1.4 细菌、真菌尺度株的测定 细菌蕴含革兰阴性菌(绿脓杆菌)和阳性菌(金黄色葡萄球菌)，真菌蕴含烟曲菌、串珠镰刀菌和茄病镰刀菌。在造就基上取少量菌落，参与1ml检测用水，超声波处置30min，2000cpm，10min，取上清。用检测用水将其按10倍稀释，别离取200μl参与100μlMG游戏官网，振荡30s，细菌内毒素测定仪测定。
1.5 标本的处置 角膜标正本自北京普仁医院眼科，为临床确诊真菌性角膜炎后，进行角膜移植，将角膜标本用检测用水冲刷后，在干净台中将其剪碎，参与1ml检测用水超声波处置30min，2000cpm，10min，取上清备用。
1.6 标本的测定和了局简直定 共检测临床诊断真菌的习染的角膜标本19例，标本处置后，用检测用水将其按10倍稀释8个稀释度，别离取200μl参与100μlMG游戏官网，振荡30s，放入细菌内毒素测定仪测定。凭据标本的浓度-功夫曲线、功夫反映曲线和功夫速度曲线确定。
1.7 细菌内毒素测定仪的检测指标 内毒素或葡聚糖与MG游戏官网中的B、C或G因子反映，形成凝胶，纪录分歧浓度的内毒素或葡聚糖在反映过程中分歧功夫的光密度值，确定OD值达到0.02的反映功夫为测定反映功夫，以反映功夫为纵坐标，以药物浓度为横坐标，做图，成为浓度功夫曲线。功夫反映曲线为某一浓度的内毒素或葡聚糖在分歧功夫的OD值，以功夫为横坐标，以样品的OD值为纵坐标，做图。功夫速度曲线为某一浓度的内毒素或葡聚糖在分歧功夫的反映速度，以功夫为横坐标，以样品的反映速度为纵坐标，做图。
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